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電泳儀常見問題處理方法
更新時間:2023-08-09   點擊次數:1398次

注意事項
1、電泳中使用的溴化乙錠(EB)為中度毒性、強致癌性物質,務必小心,勿沾染于衣物、
皮膚、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在專門電泳區域操作,戴一次性手套,并及時更換。
2、預先加入EB 時可能使 DNA 的運動速度下降15%左右,且不同構型的 DNA 的影響程度不同。所以為取得較真實的電泳結果可以在電泳結束后再用 0.5μg/ml 的 EB 溶液浸泡染色。EB在光照下易降解,若凝膠放置一段時間后才觀察,即使原來膠內或樣品已加 EB,建議選擇EB溶液浸泡染色。
3、加樣進膠時不要形成氣泡,需在凝膠液未凝固之前及時**,否則,需重新制膠。
4、電泳時溴酚蘭在瓊脂糖凝膠中的運動速度可以用于參考電泳速度,已實際電泳條帶運動速度為準。
常見問題分析

常見問題

原因

對策

DNA條帶模糊

DNA降解

實驗過程避免核酸酶污染

電泳緩沖液陳舊

電泳緩沖液多次使用后,離子強度降低,PH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果。TBE建議使用10次就更換緩沖液

所用電泳條件不合適

電泳時電壓不應超過6V/CM,溫度<30℃,巨大DNA鏈電泳,溫度應<15℃,核查所用電泳緩沖液的緩沖能力,注意經常更換

DNA上樣量過多

減少凝膠中DNA上樣量

DNA含鹽過高

電泳前通過乙醇沉淀去除多余鹽分

有蛋白污染

電泳前酚抽提去除蛋白

DNA變性

電泳前勿加熱,用TE緩沖液稀釋DNA

出現片狀拖帶或涂抹帶

PCR擴增有時出現涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往PCR體系需要優化,PCR程序需要摸索。

其對策有:調整PCR體系和PCR程序,摸索出合適的條件。

不規則DNA帶遷移

電泳條件不合適

電泳時電壓不應超過6V/CM,溫度<30℃,巨大DNA鏈電泳,溫度應<15℃,核查所用電泳緩沖液的緩沖能力,注意經常更換

DNA變性

電泳前勿加熱,用TE緩沖液稀釋DNA

帶弱或無DNA帶

DNA上樣量不夠

增加DNA上樣量,聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度高,上樣量可適當降低

DNA降解

實驗過程避免核酸酶污染

DNA跑出凝膠

縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度

EB染色的DNA,所用光源不合適

應用短波長(254nm)的紫外光源

DNA帶缺失

DNA跑出凝膠

縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度

分子大小相近的DNA帶不易分辨

增加電泳時間,核準正確凝膠濃度

DNA變性

電泳前勿加熱,用20mM Nacl 緩沖液稀釋DNA

DNA鏈巨大,常規凝膠電泳不合適

在脈沖凝膠電泳上分析

電泳時Ladder扭曲

配膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時配置

同時配置,電泳緩沖液高出液面1-2mm即可

電泳時電壓過高

電泳時電壓不應超過6V/CM

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